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研究生: 李致中
Chih-Chung Lee
論文名稱: 利用蛋白質體學方法分析猪關節中之軟骨蛋白質
Analysis of porcine articular cartilage proteins by Proteomics
指導教授: 張兗君
Yen-Chung Chang
口試委員:
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 生命科學暨醫學院 - 分子醫學研究所
Institute of Molecular Medicine
論文出版年: 2006
畢業學年度: 94
語文別: 中文
論文頁數: 1冊
中文關鍵詞: 蛋白質蛋白質體學軟骨
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  • 本論文之研究成果,是以豬的大腿關節軟骨為模型,建立一個在軟骨組織中直接萃取到最大量軟骨中蛋白質,並進行鑑定的方法學。在80℃下,經過冷凍乾燥的軟骨組織經過10分鐘的萃取,可達到最高的產率。再經過透析、氯仿-甲醇沈澱等步驟以後,可進一步進行二維電泳和MALDI-TOF等蛋白質體學的分析,一共有有17種蛋白質被鑑定出來。
    經過Cetyl pyridinium chloride(CPC)沈澱可將從軟骨組織萃取出蛋白質中的proteoglycan分離,並改善第一維等電焦集電泳(IEF)中蛋白質分離的狀況。但這方法除了結果再現性不高以外,還會流失大量的蛋白質,造成所鑑定出來的蛋白質並不是完整的軟骨組織的蛋白質體(proteome)。
    因此結果發現,我們的樣本萃取與處理方法可以鑑定出較完整的軟骨蛋白質體,往後可用於臨床上正常與病變軟骨組織上的分析,其後可建立一個軟骨組織的蛋白質體資料庫,並進行資料庫的比對,進一步可以找到病變軟骨的bio-protein marker。


    目錄 縮寫與全名對照表 摘要 壹、 前言 一、 軟骨組織簡介……………………………………………………1 二、 細胞外基質簡介…………………………………………………2 三、 研究背景…………………………………………………………4 四、 研究目的…………………………………………………………4 貳、 材料與方法 一、 藥品來源…………………………………………………………6 二、 樣品來源與製備…………………………………………………7 三、 蛋白質濃度測定…………………………………………………9 四、 醣胺素濃度測定…………………………………………………9 五、 凝膠電泳分析(SDS-PAGE)………………………………….10 六、 二維電泳分析(2-D electrophoresis)…………………………11 七、 蛋白質染色法……………………………………………………12 八、 膠體內蛋白質分解(In-gel digestion)…………………………13 九、 蛋白質鑑定………………………………………………………14 參、 結果 一、 軟骨蛋白質分析前處理技術的改進……………………………15 二、 經過CPC處理過樣本的二維電泳分析…………………………18 三、 軟骨蛋白質的二維電泳與ImageMaster 2D Elite軟體分析……20 四、 軟骨蛋白質的二維電泳分析與MALDI-TOF鑑定……………21 肆、 討論 一、 軟骨蛋白質樣本進行蛋白質體學分析前的處理………………23 二、 軟骨組織組成蛋白質的研究……………………………………25 三、 軟骨蛋白質體的直接分析………………………………………29 四、 結語………………………………………………………………30 伍、 參考文獻 圖表集 附錄

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