簡易檢索 / 詳目顯示

研究生: 黎明倩
論文名稱: 黃嘌呤氧化酶催化過程交互作用之研究
指導教授: 黃國柱
口試委員:
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 理學院 - 化學系
Department of Chemistry
論文出版年: 2004
畢業學年度: 92
語文別: 中文
論文頁數: 72
中文關鍵詞: 黃嘌呤氧化酶交互作用
相關次數: 點閱:1下載:0
分享至:
查詢本校圖書館目錄 查詢臺灣博碩士論文知識加值系統 勘誤回報
  • 【摘要】
    黃嘌呤氧化酶,分子量約為290kDa,是一個均相二聚體( homodimer )。之前的研究都認為黃嘌呤氧化酶兩個單體的催化能力是各自獨立不受彼此影響的。實驗中,我們利用異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物來研究此酵素的交互作用,此複合物的解離速度很緩慢(可由3-1(2)實驗結果得知),運用這個特點,幫助我們可以製造出只有一邊單體被異位黃嘌呤佔住的黃嘌呤氧化酶,或是兩邊都被佔住的情況,方便研究的進行。我們發現異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物解離的速度會受到相鄰單體是否也與異位黃嘌呤結合的影響,當黃嘌呤氧化酶兩個活性中心都與異位黃嘌呤形成錯和物時,會加速相鄰單體異位黃嘌呤的解離。此外,當黃嘌呤氧化酶其中一個單體與異位黃嘌呤結合形成複合物後,相鄰單體的催化能力也會改變,我們所測試的受質中,其催化速率皆受影響而變慢。最後,我們利用螢光與旋光光譜證明黃嘌呤氧化酶與異位黃嘌呤形成複合物時,酵素構型發生了改變,黃嘌呤氧化酶之輔酶FAD的螢光發生藍位移,螢光強度減弱。旋光光譜在三級結構變化的波長範圍內,黃嘌呤氧化酶與異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物也有明顯差異。我們認為,異位黃嘌呤與黃嘌呤氧化酶結合後,構型上的改變是造成交互作用的重要因素之一。


    目錄 第一章 緒論 1-1交互作用簡介 …………………………………………………. 1 1-2 酵素的調節策略 ……………………………………………… 1 1-3 異位酵素的例子 ……………………………………………… 2 1-4 異位交互作用模型 …………………………………………… 5 1-5 Michaelis-Menten方程式 …………………………………….. 7 1-6 黃嘌呤氧化酶 ……………………………………………….... 12 1-7黃嘌呤氧化酶相關疾病 ………………………………………. 16 1-8 ”受質-抑制作用”與”受質-活化作用” …………………………23 1-9異位次黃嘌呤對黃嘌呤氧化酶抑制作用 ……………………. 25 第二章 實驗原理與實驗方法 2-1實驗藥品清單 …………………………………………………..28 2-2 設備與儀器 ………………………………………………….... 29 2-3純化黃嘌呤氧化酶原理 ………………………………………..31 2-4 黃嘌呤氧化酶純化步驟 ……………………………………….33 2-5 黃嘌呤氧化酶濃度與活性測定方式 ………………………….34 2-6 除氧方式與原理 ……………………………………………….36 2-7製備異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合體 ……………………….37 2-8受質的簡介 …………………………………………………….39 2-9 螢光光譜實驗條件 ……………………………………………41 2-10旋光光譜實驗條件 …………………………………………...42 第三章 實驗結果與討論 3-1 異位黃嘌呤對異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物解離的影響…43 3-2 受質對異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物解離的影響 ……….49 3-3 異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物對其他受質的影響 ……….56 3-4 異位黃嘌呤對異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物構型的改變….67 第四章 結論 ………………………………………………………...69 第五章 參考文獻 ……………………………………………………71

    1. L. Stryer, “Biochemistry”, Fourth ed. Chap. 10, p237~239
    2. L. Stryer, “Biochemistry”, Fourth ed. Chap. 7, p157
    3. Monod, J., Wyman, J., and Changeux, J. P. (1965) J. Mol. Cell. Biol. 12, 88
    4. Koshland, D. E., Jr., Nemethy, G., and Filmer, D. (1966) Biochemistry 5, 365
    5. L. Stryer, “Biochemistry”, Fourth ed. Chap. 8, p192~194
    6. Hill, R., and Nishino, T. (1995) FASEB. J. 9, 995
    7. Hill, R., (1996) Chem. Rev. 96, 2757
    8. Massey, V., Brumby, P. E., Komai, H., and Palmer, G. (1969) J. Biol. Chem. 244, 1682
    9. Hart, L. I., McGartoll, M. A., Chapman, H. R., and Bray, R. C. (1970) Biochem. J. 116, 851
    10. Edmondson, D., Massey, V., Palmer, G., Beacham, L. M., and Elion. G.B., (1972) 247, 1597-1604
    11. L. Stryer, “Biochemistry”, Fourth ed. Chap. 29, p756
    12. http://www.zx.gov.tw/phr/phr046.htm中興藥訊第二十期
    13. B. Halliwell, “Free radical in Biological and Medicine”, chap. 8.
    14. Hofstee, B. H. J. (1955) J. Biol. Chem. 216, 235
    15. Massey, V., Brumby, P. E., Komai, H., and Palmer, G. (1969) J. Biol. Chem. 244, 1682
    16. Morpeth, F. F. (1983) Biochemica et Biophysica Acta 744, 328
    17. Rubbo, H., Radi, R., and Prodano, E. (1991) Biochemica et Biophysica Acta 1074, 386
    18. Cleere, W. F., and Coughlan, M. P. (1975) Comp. Biochem. Physiol. 50B, 311
    19. Feigelson, P., Davidson, J. D., and Robins, R. K. (1957) J. Biol. Chem. 266, 993
    20. Massey, V., Komai, H., Palmer, G., and Elion, G. B. (1970) J. Biol. Chem. 245,2837-2844
    21. Massey, V., and Edmondson, D. (1970) J. Biol. Chem. 245, 6595
    22. Nishino, T., and Tsushima, K. (1981) FEBS letters 131, 369
    23. Avis, P. G., Bergal, P., and Bray, B. C. (1955) J. Chem. Soc.1100
    24.戴麟靄,”Substrates-regulated enzyme activity—interactions between the homodimer units of xanthine oxidase”,清華大學博士論文,2003,黃國柱教授

    無法下載圖示 全文公開日期 本全文未授權公開 (校內網路)
    全文公開日期 本全文未授權公開 (校外網路)

    QR CODE